什么是序列标签位点，有什么作用

有两种确定核酸中核苷酸序列的方法：化学序列分析法(Maxam-Glbert)和酶学序列分析法(Sanger)。酶学测序法的优点是

A．碱基与特殊染料间不同的相互作用

B．一个合成引物的延伸和DNA修复合成的可靠终止

C．可同时对DNA双螺旋的两条链进行测序

D．限制性位点与DNA末端标记的相关性

E．反应是DNA特异的，RNA不会带来干扰。这样既减少纯化步骤，也节约了开支

A、SeqA蛋白抑制Dam甲基转移酶对GATC的甲基化作用

B、是复制后亲代链的标记

C、全甲基化的GATC序列是起始子蛋白DnaA的结合位点

D、错配修复系统中MutH内切酶识别结合位点

有两种确定核酸中核苷酸序列的方法：化学序列分析法(Maxam-Gilbert)和酶学序列分析法(Sanger)。酶学测序法的基本原理/优点是(  )。

  A． 碱基与特殊染料间不同的相互作用

  B． 一个合成引物的延伸和DNA修复合成的可靠终止

  C． 限制性位点与DNA末端标记的相关性

  D． 可同时对DNA双螺旋的两条链进行测序

  E． 反应是DNA特异的，RNA不会带来干扰，既减少纯化步骤，也节约开支

A、RFLP标记

B、RAPD标记

C、SSR标记

D、SNP标记

转录因子SP1结合的序列是GGCGGG。图Q7.1是SV40早期启动子序列，其中有6个用下画线标出的“GC”框。限制酶Nde和Sma Ⅰ的酶切位点也表示出来。请从该DNA片段和纯化的SP1开始，详细描述如何用DNase Ⅰ定位出SP1在SV40早期启动子上的结合位点。请注意说明起始物质是如何被标记的，以及所有必要的控制步骤。如何利用这一信息揭示哪个位点对SP1的亲和性最高?

  

  图Q7.1 SV40早期启动子序列

与大部分mRNA不同，组蛋白mRNA的3'-末端没有多聚A尾巴，相反，它们是从一个较长前体基环结构3'-末端相距几个核苷酸的位点切下来的。这一组蛋白前体的正确加工还有赖于断裂位点上的一段保守序列，用海胆做的实验显示这段保守序列可与U₇snRNP的RNA组分作用。

  你正在研究哺乳动物细胞中组蛋白mRNA的加工，想了解是否这一作用决定了它的3'-末端。如图8-3-30A所示，在海胆和人的组蛋白mRNA的3'-末端间存在惊人的相似。已知人细胞核的抽提物可正确地切除标记过的组蛋白mRNA前体。此外，如果用核酸酶去消化抽提物中的RNA，提取物不再能对加入的组蛋白前体mRNA切割了。通过加入一些含snRNP，部分纯化过的成分又能使抽提物恢复活性。

  为了更详细地研究加工反应，将对应于snRNP上与组蛋白前体作用的假定位点周围区域综合成了三段DNA寡核苷酸。一段对应于人中的保守序列，一段对应于老鼠的，另一段对应于比较所有哺乳动物的保守序列后得到的公有序列。将这些寡聚核苷酸与加有RNaseH(可消除DNA-RNA双螺旋中的RNA)的抽提物预保温，后两种寡聚核苷酸完全阻断了前体的加工，而人的没有。这两种抑制性寡聚核苷酸抽提物中的63个核苷酸的snRNA消失了。你已成功地纯化了这种snRNA，并查明了其5'-末端的序列。

  

大多数真核mRNA的3’－末端是在切割前体RNA后接着加上一段长200～300个核苷酸的polyA而成的。紧接聚腺苷酸5大多数真核mRNA的3’-末端是在切割前体RNA后接着加上一段长200～300个核苷酸的polyA而成的。紧接聚腺苷酸5’-末端上游的AAUAAA序列是多聚腺苷化的主要信号。其重要性已用很多方法验证过。一个简便的方法是利用化学修饰来干扰蛋白与RNA的相互作用。含信号序列的RNA用二乙基焦碳酸盐处理，可使A和G产生乙基碳酸衍生物。这一处理赋予修饰位点在适当情况下对苯胺高度的敏感性，并断裂。如果起始的RNA分子被一端标记，处理后基本上一个分子有一个修饰位点，接着用苯胺去断裂会生成一系列对应于RNA上各个不同A和G位点的片段（）

大多数真核mRNA的3'-末端是在切割前体RNA后接着加上一段长200～300个核苷酸的polyA而成的。紧接聚腺苷酸5'-末端上游的AAUAAA序列是多聚腺苷化的主要信号。其重要性已用很多方法验证过。一个简便的方法是利用化学修饰来干扰蛋白与RNA的相互作用。含信号序列的RNA用二乙基焦碳酸盐处理，可使A和G产生乙基碳酸衍生物。这一处理赋予修饰位点在适当情况下对苯胺高度的敏感性，并断裂。如果起始的RNA分子被一端标记，处理后基本上一个分子有一个修饰位点，接着用苯胺去断裂会生成一系列对应于RNA上各个不同A和G位点的片段(如图8-3-29)。(这个方法与DNA化学测序法非常相似)。

  为了确定关键的A和G残基，将修饰过的RNA(依旧完整)和能够进行切割及加polyA的细胞抽提液保温。RNA分子接着被分离成polyA⁺RNA和polyA^-RNA。用苯胺处理，琼脂糖电泳后分析片段(第2、3条)，第二次反应时在抽提物中加入EDTA，防止有polyA尾巴(对切割没影响)，分离切割的分子，苯胺处理后电泳鉴定(第4条)。

  

转录因子SP1结合GGGcGG序列。下图所示为SV40早期启动子中含有的六个这样的“GC”盒。限制酶NdeI和SmaI的切割位点已显示出。若已有了DNA片段和纯化的SPl，试叙述用DNaseI将SPl结合位点定位在SV40早期启动子上的详细步骤，注意要讲述原材料是如何被标记的以及各种必需的对照。画一个凝胶图显示你的结果(标记每个泳道)。如何利用这些信息、推出哪些位点与SPl有最高的亲和性?