利用任意特定引物同DNA序列特定结合位点结合，如果序列发生变化，使PCR产物产生多态性图谱，该标记为

一个癌基因，从序列上看似乎编码一个转录因子。当放在细胞中表达时，该基因的产物是完全不溶的，这影响了对其功能的直接检测。免疫染色表明，这种蛋白质定位于细胞核内，如同推测的一样，是一种转录因子。如果能够测出它所结合的DNA序列，就可以从现有的序列资料中查找已知基因启动子的天然位点，从而能够找到它所调节的基因。

  有人建议用PCR扩增同该蛋白质结合的微量DNA，思路是(图Q25.8)：①合成一组长为26个碱基的随机序列的寡聚核苷酸混合体，在该序列的两侧各有一段25个碱基的序列作为PCR扩增的引物位点[图Q25.8(a)]；②把这些寡聚核苷酸加到含有转录因子的细胞粗提取物中，转录因子可以同含有结合位点的寡聚核苷酸结合；③用转录因子特异的抗体分离同转录因子结合的寡聚核苷酸；④用PCR扩增选择到的寡聚核苷酸进行序列分析。

  

  图Q25.8 用随机的寡聚核苷酸选择和扩增特异的DNA序列(a)用于选择的原初随机序列的寡聚核苷酸，N代表任何一种核苷酸；EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ位点有利于选择DNA的克隆和序列分析。(b)同序列特异的DNA结合蛋白结合的寡聚核苷酸的选择和序列分析方案按照这一思路，用0.2ng单链随机序列的寡聚核苷酸开始了这项实验，这个寡聚核苷酸可以同一个PCR引物结合成部分双链，经过如图Q25.8(b)所示的四轮选择和复制后，用BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ消化分离到的DNA，将片段克隆到质粒中，并测定了10个独立的克隆(表Q25.1)，问：

  表Q25.1 10个克隆的序列

  

  注：画线的序列是PCR引物部位，两种序列都是从BamH Ⅰ末端开始，所有序列中结合位点的方向都是相同的。

PCR可选择性地扩增特定的靶DNA序列中的某一序列。()

PCR的引物是(  )

  A．一段RNA序列

  B．限定了PCR产物的长度

  C．可以无限长

  D．3'端可以任意修饰

  E．3'端可以互补重叠

适用于扩增已知DNA序列两侧的未知序列的方法是( )。

A．定量PCR

B．锚定PCR

C．反PCR

D．原位PCR

PCR是在引物、模板和4种脱氧核糖核苷酸存在的条件下依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。其中引物是按照与扩增区段两端序列彼此互补的原则设计的，因此每一条新生链的合成都是从引物的退火结合位点开始，并沿着相反链延伸合成的。PCR反应的特异性由下列哪一个因素决定？( )

A、模板

B、引物

C、dNTP

D、镁离子

E、退火温度

PCR技术所用的引物是待扩增的DNA区段3'端的互补序列。

关于聚合酶链反应(PCR)的叙述不正确的是( )。

A、PCR方法需要特定的引物

B、PCR技术是一种体外DNA扩增技术

C、PCR方法进行的基因扩增过程类似于体内DNA的复制

D、PCR技术能够快速特异地扩增任何目的基因或DNA

E、PCR技术需要在恒温环境进行

在PCR反应中，下列关于引物的说法错误的是

A、在引物终浓度为0.2～1μmol/L的范围内，PCR的产物量基本相同

B、引物浓度过高会降低靶序列的扩增量

C、引物只与靶序列的相应部分结合

D、引物浓度过高会促进引物错误引导非特异产物合成

E、引物浓度过高会增加引物二聚体的形成

聚合酶链式反应包括引物与模板链之间熔链及退火，讨论温度循环体系对引物-DNA双螺旋和对PCR产物的影响。