A.引物的长度通常在15bp~30bp
B.引物自身或引物之间不应存在互补序列,以防产生引物二聚体和发夹结构,干扰PCR的正常进行
C.引物中G+C的含量通常占45%~55%
D.引物的3`端可以带有生物素、荧光素等作为标记
第1题
A、首先应将RNA转化为cDNA才能进行PCR
B、逆转录酶不需要引物进行逆转录反应
C、逆转录酶不需要引物进行逆转录反应
D、除了使用DNA聚合酶外,还应使用逆转录酶
第4题
A、采用双向测序引物对扩增片段进行测序分析
B、检测HLA等位基因核苷酸多态性位点碱基情况
C、HLA-Ⅰ类基因一般检测第2、第3和第4外显子
D、直接双链测序过程不存在模棱两可结果
E、分型结果属于高分辨分型方法
第5题
A、实验中选择特异性测序引物进行测序反应
B、利用等位基因核苷酸碱基序列差异性设计测序引物
C、测序反应引物只与其中一个等位基因的序列互补
D、测序得到序列为与引物不互补的某个特定等位基因的序列
E、常用于PCR-SBT方法中模棱两可结果的区分
第6题
A、内标DNA片段显示不全不会影响样本的等位基因分型
B、Taq DNA聚合酶活性过高会导致小片段产生非模板依赖加A不完全
C、杂合子峰高比值在70%以上说明PCR扩增均衡性较好
D、模板DNA在引物的3’端结合位点出现点突变,会造成杂合子峰不均衡
第7题
A、因扩增片段长度的限制,构建复合扩增体系时只能同时扩增较少的基因座
B、miniSTR引物与传统STR引物结合区之间若存在碱基缺失或插入,易导致miniSTR与传统STR分型结果不一致
C、若某些STR基因座核心重复区上游或下游侧翼序列存在嘌呤或嘧啶碱基堆积现象,则不利于miniSTR引物设计
D、当PCR扩增产物过小时,未消耗引物上的染料分子可使产物峰变宽、信号变弱
第8题
有人建议用PCR扩增同该蛋白质结合的微量DNA,思路是(图Q25.8):①合成一组长为26个碱基的随机序列的寡聚核苷酸混合体,在该序列的两侧各有一段25个碱基的序列作为PCR扩增的引物位点[图Q25.8(a)];②把这些寡聚核苷酸加到含有转录因子的细胞粗提取物中,转录因子可以同含有结合位点的寡聚核苷酸结合;③用转录因子特异的抗体分离同转录因子结合的寡聚核苷酸;④用PCR扩增选择到的寡聚核苷酸进行序列分析。
图Q25.8 用随机的寡聚核苷酸选择和扩增特异的DNA序列(a)用于选择的原初随机序列的寡聚核苷酸,N代表任何一种核苷酸;EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ位点有利于选择DNA的克隆和序列分析。(b)同序列特异的DNA结合蛋白结合的寡聚核苷酸的选择和序列分析方案按照这一思路,用0.2ng单链随机序列的寡聚核苷酸开始了这项实验,这个寡聚核苷酸可以同一个PCR引物结合成部分双链,经过如图Q25.8(b)所示的四轮选择和复制后,用BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ消化分离到的DNA,将片段克隆到质粒中,并测定了10个独立的克隆(表Q25.1),问:
表Q25.1 10个克隆的序列
注:画线的序列是PCR引物部位,两种序列都是从BamH Ⅰ末端开始,所有序列中结合位点的方向都是相同的。
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