第1题
序列:
I M Y K Q V A Q T Q L *
AUU AUG UAU AAG UAG GUC GCA UAA ACA CAA UUA UGA GAC UUA
实验中遇到了一些困难,主要是不能利用网织红细胞(一种体外分析蛋白质合成的标准系统)的裂解产物来翻译经纯化的四膜虫mRNA。尽管mRNA的质量很好,但翻译产物却都是小分子多肽(图Q11.1,泳道1)。为了找出不能正确翻译蛋白质产物的原因,用来自烟草花叶病毒(TMV)编码的一个分子质量为116kDa的蛋白质的纯化mRNA进行了一系列对照实验。在体外系统中,TMV mRNA可被很好地翻译,在116kDa处显现一主带和一个极弱的约50kDa的小带(图Q11.1,泳道2)。加入四膜虫RNA后,较大分子质量的产物有显著增加(图Q11.1,泳道3)。加入一些四膜虫的细胞浆(去除了核糖体),TMV mRNA几乎专一地产生分子质量较大的产物(图Q11.1,泳道4)。令人高兴的是先前无活性的四膜虫mRNA现在似乎可以被翻译了(图Q11.1,泳道4)。去除TMV mRNA后,这种推测得到证实(图Q11.1,泳道5)。
图Q11.1在来自四膜虫的各种成分加入或缺省时TMV mRNA的翻译
请问:
第2题
考虑下面血红蛋白α、β链协调合成的实验。家兔的网织红细胞被3H—Lys标记10min(标记时间相对一条珠蛋白单链的合成是足够的),然后离心分离带新生链的核糖体,除去可溶珠蛋白。新生珠蛋白链被胰蛋白酶消化,使肽链C端以Lys或Arg结尾,接着用HPLC(高效液相色谱)分离出这些肽并测定它们的放射性。图Q11.2为每条肽链中相对Lys残基的位置的放射性标志图。
图Q11.2 α-珠蛋白、β-珠蛋白的合成
第3题
和RF2的基因已被克隆和测序。比较了编码RF2的基因核苷酸序列与蛋白质的氨基酸排列顺序后,有一惊人的发现,如图Q11.4中基因图谱所示,终止密码包含在基因序列之中。为排除干扰,基因和蛋白质的序列已经过仔细的检查。请问:
图Q11.4 RF2基因图
粗线表示编码序列,开始和结束处的序列作为参照
第4题
们的错误;另一方面,技术上也有困难。比如能够确切鉴定一种蛋白质到哪种程度,从概念上说,这与知道如何提纯、鉴定是两码事。解决这个问题的一个聪明的方法是利用细菌鞭毛虫惟一蛋白:鞭毛蛋白(相对分子质量为40000)。鞭毛蛋白有两个优点:首先,鞭毛(即鞭毛蛋白)能被从细菌上切下并用差速离心纯化,另外,鞭毛蛋白中不含Cys,因此允许利用Cys错误加入肽链进行灵敏的检测。为了放射性标记Cys,细菌在含(放射活性为5.0×103cpm/pmol)和过量的未标记Met的生长培养基中恰好生长一个世代(这种情况下无可测出的放射性进入Met),把所得的鞭毛蛋白纯化并进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,发现从凝胶上回收的8μg鞭毛蛋白中含有35S带来的放射性为300cpm。请问:
第6题
菌株中。大多数双重突变体为野生型,而其他仍然是rⅡB突变型,解释原因。
第7题
酸和多聚谷氨酸。从中判断哪一个密码能被确定编码哪一个特定的氨基酸?
第8题
的N端氨基酸序列:
密码 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
核苷酸 AUG GCU UCU AAC UUU ACU CAG UUC GUU CUC …
氨基酸 Ala -Ser -Asn -Phe -Thr -Gln -Phe -Val -Leu …
第10题
、Glu和Leu。A和B的回复突变株中这个位置上的氨基酸分别是Trp和Lys,突变C没有做进一步的实验,解释上述结果并推测6种菌株中该位置上的密码。
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