以高浓度的噬菌体悬液接种细菌平板，经过一定时间培养后可形成单个噬菌斑。以高浓度的噬菌体悬液接种细菌平板，经过一定时间培养后可形成单个噬菌斑（）

以高浓度的噬菌体悬液接种细菌平板，经过一定时间培养后可形成单个噬菌斑。

可衡量单个侵染周期中病毒数量增加的一步生长曲线对确定噬菌体和细菌相互作用基本参数是很重要的，请思考下面T4噬菌体的一步生长曲线。少量(0.1ml)T4噬菌体的悬浮液(10¹⁰个/ml)与100ml大肠杆菌的培养物(10⁷个/ml)混在一起在37℃下共培养。混合后5min，两份被侵染的细菌重复样品中加入氯仿振荡以杀死细菌，一份样品中加入溶菌酶破裂细胞，另一份不加酶，氯仿和溶菌酶对T4都无影响，测定所有样品中噬菌体的效价，结果如图Q4.1所示。

  

  图Q4.1 T4噬菌体的一次生长曲线

可衡量单个侵染周期中病毒数量增加的一步生长曲线对确定噬菌体和细菌相互作用基本参数是很重要的，请思考下面T4噬菌体的一步生长曲线。少量(0.1ml)T4噬菌体的悬浮液(10¹⁰个/ml)与100ml大肠杆菌的培养物(10⁷个/ml)混在一起在37℃下共培养。混合后5min，两份被侵染的细菌重复样品中加入氯仿振荡以杀死细菌，一份样品中加入溶菌酶破裂细胞，另一份不加酶，氯仿和溶菌酶对T4都无影响，测定所有样品中噬菌体的效价，结果如图Q4.1所示。

  

  图Q4.1 T4噬菌体的一次生长曲线

把少量T4噬菌体与过量的大肠杆菌细胞系B混在一起，然后在含一层厚营养琼脂细菌培养基的表面上铺一层薄的软琼脂层，细菌长成一片连续的菌苔。但在被噬菌体侵染的细菌到达的地方，噬菌体增殖并杀死周围的细菌，在云状的菌落中形成一个圆形清晰的噬菌斑。一种已观察到的病毒突变可以改变噬菌斑的形状，噬菌体T4的r突变体首先被注意到，因为它们可以在大肠杆菌B的菌落中形成更大的噬菌斑(r代表快速溶菌)。r突变体中的rⅡ类型在大肠杆菌菌株K中并不形成噬菌斑，虽然它们可以起始侵染大肠杆菌K，但侵染不成功，不产生子代病毒。它们在大肠杆菌B上可辨的噬菌斑形态及无法在大肠杆菌K中生长的特性，很早就被用于鉴定突变的一般性质和遗传密码的三联结构。为进一步了解这些经典研究，给出8个rⅡ型突变子让你鉴别。首先，你做了一系列斑点测试，用高浓度的突变1和突变2分别侵染两个大肠杆菌K平板，这样，每个平板上大部分细菌都被侵染了，然后你在平板上依次滴一滴每种突变型和野生型T4噬菌体使之排列成环状。作为对照，你在一未被侵染的大肠杆菌K平板上也做了同样的处理，过夜培养后你观察到如图Q4.2所示的结果。

  

  图Q4.2多种rⅡ突变体的斑块测试

  这些结果很有意义，但你也许会感觉迷惑。为了确定在清晰斑上出现的是哪种噬菌体，你从野生斑和突变5形成的清晰斑中收集一些噬菌体并检测它们的生长情况。如你所料，从野生斑上收集的噬菌体在大肠杆菌B和K上都可形成正常的噬菌斑。在突变5斑块上收集来的大多数噬菌体仍显示出突变体的性质：它们可以在大肠杆菌B上形成r噬菌斑，但不能在大肠杆菌K上生长；但来自突变5斑块上的某些噬菌体却表现为野生型，它们可在两个细胞株中形成正常的噬菌斑，野生型出现的频率很高，不可能来自反向突变(回复突变)，因为反向突变即使发生，频率也只有10^-6～10^-5。

把少量T4噬菌体与过量的大肠杆菌细胞系B混在一起，然后在含一层厚营养琼脂细菌培养基的表面上铺一层薄的软琼脂层，细菌长成一片连续的菌苔。但在被噬菌体侵染的细菌到达的地方，噬菌体增殖并杀死周围的细菌，在云状的菌落中形成一个圆形清晰的噬菌斑。一种已观察到的病毒突变可以改变噬菌斑的形状，噬菌体T4的r突变体首先被注意到，因为它们可以在大肠杆菌B的菌落中形成更大的噬菌斑(r代表快速溶菌)。r突变体中的rⅡ类型在大肠杆菌菌株K中并不形成噬菌斑，虽然它们可以起始侵染大肠杆菌K，但侵染不成功，不产生子代病毒。它们在大肠杆菌B上可辨的噬菌斑形态及无法在大肠杆菌K中生长的特性，很早就被用于鉴定突变的一般性质和遗传密码的三联结构。为进一步了解这些经典研究，给出8个rⅡ型突变子让你鉴别。首先，你做了一系列斑点测试，用高浓度的突变1和突变2分别侵染两个大肠杆菌K平板，这样，每个平板上大部分细菌都被侵染了，然后你在平板上依次滴一滴每种突变型和野生型T4噬菌体使之排列成环状。作为对照，你在一未被侵染的大肠杆菌K平板上也做了同样的处理，过夜培养后你观察到如图Q4.2所示的结果。

  

  图Q4.2多种rⅡ突变体的斑块测试

  这些结果很有意义，但你也许会感觉迷惑。为了确定在清晰斑上出现的是哪种噬菌体，你从野生斑和突变5形成的清晰斑中收集一些噬菌体并检测它们的生长情况。如你所料，从野生斑上收集的噬菌体在大肠杆菌B和K上都可形成正常的噬菌斑。在突变5斑块上收集来的大多数噬菌体仍显示出突变体的性质：它们可以在大肠杆菌B上形成r噬菌斑，但不能在大肠杆菌K上生长；但来自突变5斑块上的某些噬菌体却表现为野生型，它们可在两个细胞株中形成正常的噬菌斑，野生型出现的频率很高，不可能来自反向突变(回复突变)，因为反向突变即使发生，频率也只有10^-6～10^-5。

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